オートクレーブの滅菌効果の検証
投稿者 管理者 | 18 Mar
微生物学研究所の重要な実験室機器の1つは滅菌剤であり、オートクレーブは最も一般的に使用されるタイプです。 GB 4789.1-2016によると、実験装置は定期的に検査および/または較正され（適切なラベル付けを施して）、運用上のパフォーマンスと安全性を確保するために維持され、整備される必要があります。しかし、あなたの滅菌器は同様の検査を受けていますか？そのような検証が必要な場合、どのように実施する必要がありますか？
今日は、オートクレーブの滅菌効果の検証の重要な側面を要約します。
オートクレーブの滅菌効果を検証するための一般的な方法には、化学インジケーター法、固定点温度計法、自発温度プローブ法、および生物学的指標法が含まれます。これらの方法の背後にある原則は類似しており、主に滅菌剤の内部の温度が滅菌中に必要なレベルに達するかどうかを確認することに焦点を当てています。実験室の特定の条件に応じて、検証のために1つまたは複数の方法を選択できます。
1。化学インジケータ法
原則：化学指標は、特定の温度と期間にさらされると色の変化または変形を受け、滅菌パラメーターが満たされているかどうかを評価できます。
実験室で一般的に使用される指標は、3Mオートクレーブインジケーターテープです。これは、滅菌前後の色を変化させて有効性を示します。このテープは、特別な接着テープに縞模様に印刷された熱に敏感な化学物質と色の発達剤で作られています。テープは、最小長さ5 cmでパッケージの外側に適用し、より良い接着とシーリングのためにしっかりと押します。 121°Cで20分間、または130°Cで4分間滅菌した後、テープの斜めの白いストライプは完全に黒くなります。色の変化が不均一であるか、不完全な場合、パッケージは滅菌条件を満たしていない可能性があります。
2。固定点温度計メソッド
原理：この方法は、従来の臨床温度計と同様に、到達した最高の温度を保持する水銀温度計を使用します。滅菌中にオートクレーブ内で達成される最高温度を決定するのに役立ちます。
検証のために、水で満たされた大きな円錐形のフラスコの中に水銀温度計が配置されます。滅菌中、フラスコはオートクレーブの上部と下部の両方に配置されます。滅菌後、温度計の読み取り値は必要な温度に対してチェックされます。ただし、この方法は温度を検証するだけであり、滅菌期間が十分であるかどうかを確認しておらず、オートクレーブ検証の最も基本的な基準となっています。
3。自己メイドの温度プローブ方法
原理：この方法では、熱にさらされたときに特定の化学物質の融解と再結晶特性を活用します。これらの化学物質を小さなガラスチューブ内に密閉し、オートクレーブに配置することにより、滅菌後の結晶形成は、必要な温度に到達したかどうかを示すことができます。
一般的に使用される試薬は、121〜123°Cの融点を持つベンゾ酸です。必要な滅菌温度に密接に一致しています。滅菌中、固体ベンゾ酸を小さなガラスチューブに密閉し、オートクレーブ内に配置します。プロセス後、ベンゾ酸の結晶構造を調べて、必要な温度が達成されたかどうかを判断します。
固定点温度計と同様に、このアプローチは温度のみを示し、滅菌期間で十分かどうかを確認できません。
4。生物学的指標法
原理：この方法では、非病原性ジオバチルスStearothermophilus胞子を指標生物として使用して、熱滅菌の有効性を評価します。これらの胞子は熱に対して非常に耐性があり、クロストリジウムボツリヌス胞子と同様の熱抵抗があるため、オートクレーブが滅菌要件を満たしているかどうかを評価するための信頼できる参照となっています。
生物学的指標には3つの形式があります。
胞子の懸濁液
胞子ストリップ
培地と組み合わせた胞子ストリップ（生物学的インジケーターチューブ）
生物学的指標は通常、滅菌チャンバー内の5つの場所に配置されます。
低レベル：フロント、ミドル、バック
アッパーレベル：センター
滅菌後、指標はブロモクレソール紫色のグルコースペプトン水に接種され、55〜60°Cで2〜7日間インキュベートされます。
培地の色が透明で変化していない場合、胞子は殺されており、効果的な滅菌が示されています。
培地が黄色で濁った場合、胞子は生き残っています。つまり、滅菌プロセスは効果がありませんでした。
同じ検証方法は、胞子懸濁液と胞子ストリップの両方に適用されます。
多くの研究所は、胞子の懸濁液やストリップと同様に機能する市販の生物学的指標チューブも使用しています。これらのチューブには、培地培地のガラスの増加装置とともに、G。tearothermophilusの胞子が含まれています。オートクレーブ後、チューブ内のガラスのampouleを粉砕して培地を放出し、チューブを56°Cでインキュベートし、陽性対照を含みます。
滅菌が効果的でない場合、生存可能な胞子が成長し、スープを黄色に変えます。
滅菌が成功した場合、胞子は不活性化され、スープは紫色のままです。
オートクレーブ検証の頻度
現在、オートクレーブを検証する頻度を定義する厳格な規制基準はありません。ただし、研究所は独自の検証スケジュールを確立し、それを厳守する必要があります。
操作の容易さと信頼できる検証のために、化学インジケーターテープと生物学的指標チューブを強くお勧めします。これらの方法はユーザーフレンドリーであり、滅菌効果の包括的な評価を提供します。
オートクレーブのための重要な考慮事項
（完全に自動化された輸入オートクレーブの一部は、手動換気を必要としない場合があります）
オートクレーブを使用する場合、蒸気を導入しながらチャンバーから冷気を除去することが不可欠です。排気口は、すべての冷たい空気が排出されるまで開いたままで、内部の均等な温度分布を確保します。
チャンバー内に空気が残っている場合、圧力計は正しい圧力を示している可能性がありますが、実際の温度は予想よりも低くなります。残留空気が多いほど、不一致が大きくなり、不完全な滅菌につながります。
（発酵ベースのメディアを滅菌するときに小さなチューブで気泡に遭遇する人のために、結果を改善するために空気の避難を増やしてみてください。）
